Ns NPV杂交瘤抗体的研究

本文研究了抗纯化N.Sertifer NPV的杂交瘤抗体。病毒的包涵体是通过K-系列离心而提纯,由Frank Lewis博士提供。每个BALB/C小白鼠每次用200μg抗原免疫。最后一次注射是在细胞融合之前4～7天。取2×10~8脾细胞与2×10~7骨髓瘤细胞(NS-1或P_3×63)在50％PEG 4000(Sigma)存在下进行融合,用HAT来选择杂交瘤细胞。用间接ELISA法来筛选阳性的杂交瘤细胞。 13个细胞系已筛选成功,并对其产生的免疫球蛋白进行了分型。选择三种Lepidopteran NPVs用于交叉保护试验。除三种杂交瘤抗体外,其他10种对这三种病毒均有不同程度的交叉反应。     

禽流感免疫抗体消长规律研究

用禽流感(AI)灭活疫苗免疫120日龄蛋鸡后,分别于30,50,70,90,110,130d检测AI-HI抗体。检测结果表明,30dAI抗体为5.0log2;70d为7.11log2,抗体效价达到最高值;到90d,AI抗体效价为6.12log2,开始下降;110dAI抗体效价降至4.65log2;120dAI抗体效价已降到临界值以下,为3.2log2。AI灭活疫苗免疫期在120d以内。     

Maternal Antibody Protected Chicks from Growth Retardation and Immunosuppression Induced by Early Reticuloendotheliosis Virus Infection

To determine if the maternal antibody from breeders vaccinated with cell culture-adapted reticuloendotheliosis virus （REV） could protect chicks from early REV infection, one-day-old chicks with or without anti-REV maternal antibodies were inoculated with REV, and then their growth rates and antibody titers to Newcastle disease virus （NDV） and avian influenza virus （AIV）, after vaccination with inactivated vaccines, were compared. This study indicated that REV infection could cause growth retardation and severely inhibit immune reactions to inactivated vaccines against NDV and Avian influenza virus （AIV, H9 and H5） in one-day-old broilers without maternal antibodies specific to REV. Maternal antibody from breeders vaccinated with an attenuated REV vaccine effectively protected REV-challenged birds from growth retardation and immunosuppression on antibody reactions to NDV and AIV vaccines. Four weeks after vaccination, the HI titers to NDV, AIV-H9, and AIV-H5 in maternal antibody positive and negative groups were 3.36 ＋- 2.04 versus 1.58± 1.69 （P〈0.01）, 6.27±3.87 versus 0.71 ± 1.60 （P〈0.01）, and 6.72±3.92 versus 0.54± 1.44 （P〈0.01）. Maternal antibodies from breeders vaccinated with REV vaccine could successfully protect chicks from REV infection and effectively prevent REV-induced growth retardation and immunosuppression in antibody responses to NDV and AIV.     

提高细胞融合率和杂交瘤细胞过量生长的方法

B淋巴细胞促分裂素—鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,STM)细胞壁水溶性蛋白提取物的应用,以及延迟使用HAT的选择性培养基等条件的改进,使细胞融合率提高到90％以上。分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系阳性率提高到50％以上。并得到了不同类和亚类的单克隆抗体。本文也对某些影响杂交瘤细胞生长的因素和条件作了讨论。     

肉鸡及其鸡胚中CAV和ALV的PCR检测

应用PCR技术对山东省3个中小型AA肉种鸡场的鸡胚、1日龄雏鸡和子代肉鸡CAV和ALV的感染情况进行了检测。用相同的方法直接采集样品的不同组织提取2种病毒DNA,进行PCR扩增及PCR产物的克隆和序列测定。结果表明:被检的3个肉种鸡场均有这2种病毒的感染,其中CAV的阳性率24.22%,ALV的阳性率17.56%,二者共感染的阳性率8.89%。感染鸡各组织中病毒含量也有差异,CAV以脾脏最多,ALV以肾脏最多。对肝脏进行细菌分离培养,并对40日龄商品肉鸡进行ND血凝抑制(HI)抗体效价检测,发现大肠杆菌等细菌感染阳性率较高,ND-HI抗体效价显著偏低。说明该地区肉种鸡场和商品鸡场均存在严重的CAV和ALV感染以及与细菌性疾病的共感染,并导致鸡只的机体免疫力下降。     

几种中药成分与IL-2免疫协同作用的比较

将420羽罗曼雏鸡随机均分为14组，14日龄时用新城疫Ⅳ系苗免疫，并分别肌肉注射当归多糖（CAPS）、黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、淫羊藿多糖（EPS）、蜂胶黄酮（PF）和人参皂苷（GS）6种中药成分加白介素2（IL-2），每天1次，连用3d。分别在不同时间点检测新城疫病毒HI（NDV-HI）抗体效价，并计算免疫器官指数。结果表明，APS、IRPS、EPS、PF和GS加IL-2在免疫后7～14d都能显著提高抗体效价，APS、IRPS和EPS加IL-2在免疫后4周显著促进免疫器官发育。提示，中药成分与IL-2合用有一定的免疫协同作用。     

细胞因子Daintain/AIF-1的纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定

由猪小肠中纯化鉴定Daintain/AIF-1,并以其为免疫原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备得到4株稳定分泌抗体的单克隆细胞株。对单抗效价、亚类、亲和常数进行分析,4株单抗都属于IgG1(κ)。又经West-ern blot证实,所制备的抗体能特异性与Daintain/AIF-1结合。     

用仔猪副伤寒沙门氏菌自制荧光抗体检测仔猪副伤寒的研究

用兔抗仔猪副伤寒沙门氏菌抗体自制荧光抗体,可在2~3 h内对仔猪副伤寒病作出诊断,比直接镜检更具有特异性和敏感性。     

鸡抗鸭副黏病毒病高免卵黄抗体的研制

为了寻找有效的防治鸭副黏病毒病的途径。分离出1株鸭副黏病毒,经鉴定并命名为鸭PMV DY-1株,并以此毒株作为免疫毒株,应用非鸡新城疫免疫健康鸡群作为免疫蛋源,制备鸡抗鸭副黏病毒病高免卵黄抗体,经实验室检测和临床试验应用。结果表明,研究获得的高免卵黄抗体应用效果良好,安全、高效,是目前紧急预防治疗鸭副黏病毒病较有效、较经济的方法之一。     

伊氏锥虫单克隆抗体制备及性质研究

本研究运用杂交瘤技术成功地分离了B_8、I_2两株分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体(McAb)的细胞系。首先用可溶性伊氏锥虫抗原接种BALB/C小鼠,经过一定的免疫程序后,取其脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经过两次有限稀释法克隆,用ELISA方法选育出B_8、I_2两株产生抗伊氏锥虫McAb的细胞株。用琼脂扩散法与标准羊抗鼠亚类血清反应证明两种McAbs皆隶属于IgG_1亚类。细胞株在连续传代及冻存复苏后其分泌抗体能力稳定;经多种血清学反应证实,这两株McAb与伊氏锥虫可溶性抗原不起凝集反应,只有ELISA反应阳性。pH稳定试验表明,B_8株McAb比I_2株稳定。